4-Nitrophenyl Beta-D-galactopyranoside CAS:200422-18-0

השפעה: ONPG הוא מצע המשמש במיוחד לזיהוי נוכחות ופעילות של האנזים β-galactosidase.כאשר אנזים β-galactosidase קיים ופעיל, הוא מבקע ONPG לשני מוצרים: o-nitrophenol ונגזרת גלקטוז.שחרור o-nitrophenol גורם לשינוי צבע צהוב, אותו ניתן למדוד באמצעות ספקטרופוטומטר.

יישום: ל-ONPG יש מספר יישומים בביולוגיה מולקולרית וביוכימיה:

קביעת פעילות β-galactosidase: ONPG משמש בדרך כלל למדידה וכימות של פעילות האנזים β-galactosidase.ניתן למדוד בספקטרופוטומטרית את קצב יצירת ה-o-nitrophenol, שהוא פרופורציונלי ישיר לפעילות האנזים.

ביטוי גנים וויסות: ONPG משמש לעתים קרובות בניסויים הקשורים למחקרי ביטוי וויסות גנים.הוא משמש לעתים קרובות במבחני חלבון היתוך, כמו מערכת היתוך lacZ הנפוצה, כדי לחקור את הביטוי של גנים תחת שליטה של ​​מקדמים ספציפיים.פעילות הבטא-גלקטוזידאז הנמדדת באמצעות ONPG מספקת תובנות לגבי רמת ביטוי הגנים.

סקר לפעילות β-galactosidase: ניתן להשתמש ב-ONPG כשיטת סקר קולורימטרית בטכנולוגיית DNA רקומביננטי לזיהוי נוכחות ופונקציונליות של הגן LacZ, המקודד ל-β-galactosidase.שיטת סקר זו מסייעת בזיהוי שיבוטים המכילים את הגן המעניין.

מחקרי קינטיקה של אנזים: ONPG שימושי גם בחקר הקינטיקה של אנזים β-galactosidase.על ידי מדידת קצב התגובה של אנזים-סובסטרט בריכוזי מצע שונים, ניתן לקבוע פרמטרים קינטיים כגון קבועי Michaelis-Menten (Km) וקצבי תגובה מקסימליים (Vmax).