כיצד לקבוע את הריכוז האופטימלי?
עבור המשרה IPTG (isopropyl-beta-d-thiogalactoside), ככל שהריכוז גבוה יותר, כך ייטב.הריכוז האופטימלי תלוי בתנאי הניסוי הספציפיים ובאפקט האינדוקציה הרצוי.
בדרך כלל, הריכוז של IPTG משמש בטווח של 0.1-1 mM.ריכוזים נמוכים יותר יכולים להפחית השפעות שליליות על צמיחת תאים ויכולים להפחית ציטוטוקסיות עקב ביטוי יתר של חלבוני המטרה.ריכוזים גבוהים יותר עלולים לגרום לעומס מטבולי מוגזם של התא, להשפיע על צמיחת התאים ויעילות הביטוי.
הדרך לקבוע את הריכוז האופטימלי יכולה להיות להעריך את רמת הביטוי של חלבון המטרה על ידי ביצוע בדיקות אינדוקציה של IPTG בריכוזים שונים.ניתן לבצע בדיקות תרבית בקנה מידה קטן באמצעות טווח של ריכוזי IPTG (למשל 0.1 מ"מ, 0.5 מ"מ, 1 מ"מ וכו') וניתן להעריך את השפעת הביטוי בריכוזים שונים על ידי זיהוי רמת הביטוי של חלבון המטרה (למשל מערבי זיהוי כתם או פלואורסצנטי).על פי תוצאות הניסוי, הריכוז עם אפקט הביטוי הטוב ביותר נבחר כריכוז האופטימלי.
בנוסף, אתה יכול גם לעיין בספרות הרלוונטית או לניסיון של מעבדות אחרות כדי להבין את טווח ריכוזי ה-IPTG הנפוץ בתנאי ניסוי דומים, ולאחר מכן לבצע אופטימיזציה ולהתאים בהתאם לצרכי הניסוי.
חשוב לציין שהריכוז האופטימלי עשוי להשתנות בהתאם למערכות ביטוי שונות, חלבוני מטרה ותנאים ניסיוניים, ולכן עדיף לבצע אופטימיזציה על בסיס כל מקרה לגופו.
זמן פרסום: 28-2023 בספטמבר