יש סביבנו הרבה גיבורים לא מושרים, שנראים רגילים, אבל למעשה הם תורמים לנו הרבה בשקט.Proteinase K הוא "הגיבור הבלתי מפורסם" בתעשיית הדיאגנוסטיקה המולקולרית, אם כי בהשוואה ל"גדולים והחזקים" בתעשייה, Proteinase K הוא כה נמוך עד שמזמן התעלמנו מחשיבותו.עם פרוץ מגיפת הכתר החדשה זינק הביקוש לפרוטאינז K, וההיצע בבית ובחוץ נמצא הרחק מאחורי הצריכה, וכולם פתאום הבינו שהפרוטאינז K כל כך חשוב.
מה השימוש בפרוטאינז K?
Proteinase K הוא פרוטאז סרין בעל פעילות אנזים פרוטאוליטי ויכול לשמור על פעילות במגוון רחב של סביבות (pH (4-12.5), חוצץ עתיר מלח, טמפרטורה גבוהה של 70°C וכו').בנוסף, פעילות פרוטאינז K אינה מעוכבת על ידי SDS, אוריאה, EDTA, גואנידין הידרוכלוריד, גואנידין איזותיוציאנט וכדומה, וכמות מסוימת של חומר ניקוי יכולה גם לשפר את פעילות פרוטאינז K. בטיפול רפואי (חיטוי וירוסים ומיקרוביאליים ), מזון (ריכוך בשר), עור (ריכוך שיער), ייצור יין (הבהרת אלכוהול), הכנת חומצות אמינו (נוצות מפורקות), מיצוי חומצות גרעין, הכלאה באתרו וכו', פרוטאינז K יש יישומים.היישום הנפוץ ביותר הוא מיצוי חומצת גרעין.
Proteinase K יכול לבצע אנזיזיזציה של כל מיני חלבונים בדגימה, כולל ההיסטונים הקשורים בחומצות גרעין, כך שניתן יהיה לשחרר את חומצות הגרעין מהדגימה ולשחרר לתוך התמצית, מה שמקל על השלב הבא של מיצוי וטיהור.בזיהוי חומצת גרעין ויראלית, פרוטאינז K הוא אחד המרכיבים החשובים בתמיסת דגימת הנגיפים.Proteinase K יכול לפצח ולהשבית את חלבון המעיל של הנגיף, שהוא בטוח יותר בשלב ההובלה והגילוי;בנוסף, proteinase K יכול גם לפרק את RNase מונע את הפירוק של RNA ויראלי ומקל על זיהוי חומצות גרעין.
התהילה בין לילה של פרוטאינז K
בין אם בתחום המחקר המדעי ובין אם בתחום ה-IVD, מיצוי חומצת גרעין הוא הניסוי הבסיסי ביותר, ולכן פרוטאינז K תמיד היה קיום חשוב מאוד.עם זאת, בעבר, proteinase K היה הרבה פחות מוכר מתפקידו.חלק גדול מזה היה בגלל שיחסי ההיצע והביקוש של פרוטאינז K היו יציבים מאוד.מעטים האנשים שיחשבו שאספקת פרוטאינז K תהיה בעיה.
עם פרוץ מגיפת הכתר החדשה, הביקוש לבדיקת חומצות גרעין גברה.נכון לסוף יוני 2020, סין השלימה כמעט 90 מיליון מבחני כתר חדשים, ומספר זה מדאיג עוד יותר בקנה מידה עולמי.בניסויים של מיצוי חומצות גרעין, ריכוז העבודה של proteinase K הוא כ-50-200 מיקרוגרם/מ"ל.בדרך כלל, נדרשים כ-100 מיקרוגרם של פרוטאינז K כדי לחלץ דגימה של חומצת גרעין.בשימוש בפועל, על מנת להגביר את היעילות של מיצוי חומצת גרעין, לעתים קרובות ישמש Proteinase K בכמות מוגברת.זיהוי חומצות גרעין של נגיף הקורונה החדש הביא לכמות גדולה של ביקוש לפרוטאין K.מאזן ההיצע והביקוש המקורי של פרוטאינז K נשבר במהירות, ופרוטאינז K הפך בן לילה לחומר חשוב למניעת מגיפה.
קשיים בייצור פרוטאינז K
למרות שעם התפתחות המגיפה, הערך החשוב של פרוטאינז K הוערך על ידי אנשים, זה מביך שבגלל רמת המפתח המופרזת של פרוטאינז K, מעט חברות מקומיות היו מעורבות בייצור פרוטאינז K. כאשר אנשים רוצים לבסס ייצור פרוטאינז K במהלך תהליך הייצור, התגלה כי פרוטאינז K הוא חלבון מיוחד ביותר.זה מאתגר ביותר להרחיב את כושר הייצור של proteinase K בפרק זמן קצר.
הייצור בקנה מידה גדול של proteinase K מתמודד עם הקשיים הבאים
1. הבעה נמוכה
Proteinase K יכול לפרק באופן לא ספציפי את רוב החלבונים ולגרום לרעילות רצינית לתא המארח של הביטוי.לכן, רמת הביטוי של proteinase K היא בדרך כלל נמוכה מאוד.הקרנה של מערכות ביטוי וזנים המבטאים מאוד פרוטאינז K דורשת בדרך כלל מחזור ארוך יותר.
2. שאריות של פיגמנטים וחומצות גרעין
תסיסה בקנה מידה גדול מציגה כמות גדולה של פיגמנט ושאריות חומצת גרעין מארח.קשה להסיר זיהומים אלה בתהליך טיהור פשוט, וטיהור מורכב מייקר את העלות ומפחית את קצב ההחלמה.
3. חוסר יציבות
Proteinase K אינו יציב מספיק, הוא יכול לבצע אנזימים, וקשה לאחסן אותו ביציבות ב-37 מעלות צלזיוס לאורך זמן ללא חומר מגן.
4. קל לזרז
בעת הכנת האבקה המיובשת בהקפאה של פרוטאינז K, על מנת להבטיח שתכולת המוצק של פרוטאינז K באבקה המיובשת בהקפאה תהיה גדולה, יש צורך להוסיף חומר הגנה מיובש בהקפאה בריכוז גבוה, אך כאשר ריכוז של proteinase K מגיע ל-20mg/mL ומעלה, זה קל. ההצטברות יוצרת משקעים, מה שמביא קשיים גדולים לייבוש בהקפאה של proteinase K עם תכולת מוצקים גבוהה.
5. השקעה גדולה
Proteinase K הוא בעל פעילות פרוטאז חזקה והוא יכול לבצע הידרוליזה של פרוטאזות אחרות במעבדה.לכן, proteinase K דורש אזורי ייצור מיוחדים, ציוד וכוח אדם למחקר ופיתוח וייצור.
תמיסת proteinase K של XD BIOCHEM
ל-XD BIOCHEM פלטפורמת ביטוי וטיהור חלבונים בוגרים, ובעלת ניסיון עשיר בביטוי וטיהור של חלבונים רקומביננטיים ואופטימיזציה של תהליכי ייצור.באמצעות היווצרות מהירה של צוות מחקר ופיתוח, התגבר תהליך הייצור בקנה מידה גדול של proteinase K.התפוקה החודשית של אבקה מיובשת בהקפאה היא יותר מ-30 ק"ג.למוצר יש ביצועים יציבים, פעילות ספציפית לאנזים גבוהה, וללא שאריות ציטוכרום וחומצות גרעין מארח.ברוכים הבאים ליצור קשר עם XD BIOCHEM השג חבילת ניסיון (אימייל:sales@xdbiochem.comטל': +86 513 81163739).
הפתרונות הטכניים של XD BIOCHEM כוללים
באמצעות אינטגרציה של פלסמיד מרובה עותקים, נבחרים זנים בעלי ביטוי גבוה עם רמת ביטוי של 8g/L, מה שמתגבר על הבעיה של רמת ביטוי נמוכה של proteinase K.
באמצעות הקמת תהליך טיהור רב-שלבי, שיירי הציטוכרום המארח וחומצת הגרעין של proteinase K הוסרו בהצלחה מתחת לערך הסטנדרטי.
באמצעות בדיקת תפוקה גבוהה של ניסוחי חיץ מגן, נבחר חוצץ שיכול לאחסן פרוטאינז K ביציבות ב-37 מעלות צלזיוס.
מאגרי ההקרנה מתגברים על הבעיה שקל להצטבר ולזרז פרוטאינז K בריכוזים גבוהים, ומניח את הבסיס לתכולת המוצקים הגבוהה של פרוטאינז K לייבוש בהקפאה.
דגימת XD BIOCHEM proteinase K
בדיקת יציבות XD BIOCHEM proteinase K: לא יהיה שינוי משמעותי בפעילות לאחר 80 ד' בטמפרטורת החדר
בדיקת יציבות XD BIOCHEM proteinase K: לא יהיה שינוי משמעותי בפעילות לאחר 80 ד' בטמפרטורת החדר.
השוואה בין השפעת מיצוי חומצת הגרעין של XD BIOCHEM proteinase K ומוצרים מתחרים.בתהליך מיצוי חומצת גרעין משתמשים ב-XD BIOCHEM ובפרוטאינז K תחרותי בהתאמה.יעילות המיצוי של XD BIOCHEM proteinase K גבוהה יותר וערך ה-Ct של גן המטרה נמוך יותר.
זמן פרסום: 31 בדצמבר 2021